TECHNIQUES DE FRACTIONNEMENTS Centrifugation, ultracentrifugation et Sédimentation jeudi 6 octobre 2011 professeur SAALAOUI Ennouamane, STE+ SVI S5: 2011/2012 pr,ncpe • Méthode qui permet de séparer les particules dun solvant. • En biologie, il s’agit ors (fractionnement cellu re) • Le sang avec de l’hé éléments qui sédime • C’est régi par la forc • La loi F m. g où g est l’accélération due à la pesanteur • La seconde force de friction : loi de Stocks professeur SAALAOUI Ennouamane, STE* SVI S5: 2011/2012
Principe schématisé f = 6. p. n . r. v rn•g La force de friction STE+ SVI SS: 2011/2012 L’accélération par rotation w2 . x • x : distance qui sépare l’axe du rotor du fond du tube de centrifugation. w est la vitesse de rotation angulaire du rotor w = 2 p n/60 n: Nombre de tours par minute du rotor Professeur SAALAOUI Ennouamane, STE+ SVI S5: 201112012 F = m . g=m. w2 . x w = 2 p n/60 o x On dit qu’on fait une centrifugation à y rpm avec le rotor z qui se caractérise avec son rayon équivalent de x dans la formule
La règle générale: donner l’accélération en Nombre de g 9. 81 Principe de la centrifugation F : Force centrifuge A : poussée d’Archimède f Particule m dispersées Professeur SAALAOUI Ennouamane, STE+ SVI S5: 2011/2012 Appareillage rotor horizontal Début de la centrifugation au moment de la centrifugation État du repos En rotation Forces des Différents types de rotor professeur SAALAOUI Ennouamane, STE+ SVI S5: 20111201 2 Fractionnement cellulaire Potter Fractionnement sur gradient de saccharose discontinu
Généralités 201 1/2012 Rotor oblique 450 Surnageant Culot Rotor Axe de rotation Ultracentrifugation • Particule en centrifugation aura un déplacement spécifique à tout instant et une concentration donnée en tout point de la cellule de mesure • La mesure sera faite par: – Réfractométrie (déviation par le gradient de concentration – Absorptiométrie (UV) professeur SAALAOI_JI Ennouamane, STE+ SVI S5: 2011/2012 Le terme « isopycnique » uniquement aux gradients auto-générés.
Cependant ce terme ‘applique à tous les cas où on centrifuge à équilibre dans un gradient continu. Séparation zonale en gradient continu : selon leur taille (Le gradient, dont la concentration maximale est moins dense que les particules, ne sert qu’à ralentir la sédimentation). Professeur SAALAOUI Ennouamane STE+ SVI S5: 2011/2012 ne faut pas négliger par rapport à la sédimentation • Il finissent par s’annuler à l’équilibre et les particules ne se déplacent plus. facteur déterminant c’est la densité Gradient de densité ?? A réquilibre , la molécule se stabilise au niveau de sa densité • On a des gradient continus • On a des gradients discontinus • On a des gradients isopicniques Conseils pour une centrifugation • S’assurer que le diapositif de verrouillage est bien fermé; • Équilibrer les tubes • La rotation maxmale • Les tubes doivent être conformes et protégés Applications Constante de sédimentation La masse molaire d’une macromolécule Séparation de macromolé Séparation de macromolécules
