Explication de la méthode de Sanger La méthode de Sanger est un procédé utilisé pour le séquençage de l’ADN, c’estàdire déterminer l’ordre d’enchaînement des nucléotides (ATCG) dans un fragment d’ADN particulier. pour ce faire, quatre microtubes sont nécessaires. Chacun contient un fragment de l’ADN a séquencer, une amorce, un ADN polymérase (enzyme) et des désoxyribonucléotides (dATP, dCTP, dlTP et dGTP). De plus, les tubes contiennent to View aussi des didésoxyribonucléoti le deuxième le ddA de suite pour les deu pour commencer, le or’ fragment d’ADN va alors se dédoubler.
LJne fois le tube refroidi, le fragment d’ADN 53′ (brin matrice) qui lui correspond. ossède le ddGTP, ddCTP). e chauffé. Le l’amorce se fixera sur C’est le point de départ. Ensuite, l’ADN polymérase commence la synthèse du brin matrice en ajoutant à l’amorce les désoxyribonucléotides complémentaires, cela forme le brin complémentaire. L’ADN polymérase synthétise toujours FADN dans le sens 3’5′. Cest au moment de la polymérisation que les didésoxyribonucléotides jouent un rôle particulier.
Ceuxci agissent à titre de fin de chaine, ils stoppent l’action de PADN polymérase uisqu’ils ne contiennent pas de groupement 3’OH pour l’ADN polymérase a le choix entre des désoxyribonucléotides et des didésoxyribonucléotides. Étant donné que chaque tube possède un type de didésoxyribonucléotides différent et des millions de copies du brin matrice, les brins complémentaires seront donc coupés à tous les nucléotides passibles (toutes les possibilités de longueur seront présentes). Par la suite, le contenu des tubes est placé dans quatre puits distincts (correspondant aux quatre nucléotides) de gel d’électrophorèse.
Le courant st mit et les fragments de brins complémentaires migrent vers la cathode selon leurs longueurs, les plus court descendant plus bas. Enfin, la séquence de nucléotides du brin complémentaire 3’5′ se lit de la cathode vers l’anode à l’aide de lumière ultraviolette ou de rayons X. Par conséquent, la séquence du brin matrice (5’3′) se lit de la cathode vers Panode en utilisant les nucléotides correspondants Sources • cold spring Harbor Laboratory (CSH), «Early DNA sequencing», http://www. dnalc. org/resources/animations/sangerseq. htm (Page consultée le 24 mars 2015).
